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MTT实验是一种用于检测细胞增殖和细胞活力的实验方法,全称是3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)实验。MTT是一种黄色水溶性化合物,可以被活细胞中的线粒体酶还原成紫色不溶于水的甲瓉(Formazan)。
MTT实验的基本步骤:
细胞培养:将细胞按照一定的密度接种到细胞培养板中,并在适宜的条件下培养至细胞贴壁生长。
药物处理或实验操作:根据实验设计,对细胞进行不同的处理,如添加药物、改变培养条件等。
MTT添加:处理一定时间后,向每个培养孔中加入一定浓度的MTT溶液,通常是在细胞培养的最后4-6小时进行。
孵育:将加入MTT的培养板放回细胞培养箱中继续孵育,通常孵育时间为1-4小时。
去除培养基:孵育结束后,小心吸除上清液,避免扰动细胞沉淀。
溶解甲瓉:向每个培养孔中加入有机溶剂(如二甲基亚砜,DMSO)以溶解甲瓉晶体。
测量吸光度:使用酶标仪在570 nm波长下测量吸光度(OD值),有时也会在630 nm或其他波长下测量作为参考。
数据分析:通过比较实验组与对照组的吸光度值,可以计算出细胞的增殖率或存活率。
MTT实验的优点包括:
操作简单,无需特殊设备。
可用于高通量筛选。
结果稳定,重复性好。
MTT实验的局限性:
MTT还原产物甲瓉的溶解和测量可能受到细胞数量和类型的影响。
某些细胞类型或药物可能会干扰MTT的还原,导致结果不准确。
MTT实验无法区分活细胞和死细胞,只能反映细胞的代谢活性。
MTT实验广泛应用于药物筛选、细胞毒性评估、细胞增殖研究等领域。在使用MTT实验时,需要注意实验条件的控制,以确保结果的准确性和可靠性。
1.细胞类型,客户是否提供细胞;
2.检测类型,是否需要进行药物处理或敲除过表达处理,敲除或过表达处理是否提供相关载体;
3.是否需要提供酶标仪检测原始数据;
4.检测时间;
5.客户是否提供MTT试剂和DMSO试剂。
1. 细胞株 400/株,贴壁细胞80元培养至10*6,悬浮细胞100元培养至10*6;客户提供300元/株适应性培养1-2周;
2. 96孔板半板400元,全板800元;
3. 药物处理费用一个药物150元,载体转染费用一个载体60元;
4. 图片采集费用15元/组。
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